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2013-11
PCR技术专题：PCR技术原理、实验步骤和应用
一、实验目的1.掌握聚合酶链式反应的原理。2.掌握移液枪和PCR仪的基本操作技术。二、实验原理PCR技术，即聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCR）是由美国PECetus...
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2013-11
转染专题：脂质体转染的几个实验方法
摘要：本实验介绍了脂质体转染的几个方法。实验原理脂质体（LR）试剂是阳离子脂质体DOTMA和DOPE的混合物（1：1）。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前条件下zui方面的转染方法之一...
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2013-11
感受态专题：感受态细胞的制备及溶液配制
实验试剂LB培养基，KB培养基，10%甘油，液氮，0.1MCaC12溶液实验设备超净工作台，摇床，离心机，250mL离心瓶，0.5mL的离心管实验材料大肠杆菌，农杆菌和假单胞杆菌实验步骤1.电击感受态...
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2013-11
感受态专题：真核细胞的转染实验步骤
1.在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml*培养基，置CO2孵箱中37℃培养过。2.待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液：i.溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到25...
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2013-11
感受态专题：转化克隆的筛选和鉴定
1．目的学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。2．原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。3．器材旋...
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2013-11
感受态专题：细胞瞬时转染
原理：通过脂质体介导转染法及电穿孔等基因转染技术，将靶基因导入细胞，一般在转染后48小时左右，靶基因即可在细胞内表达。根据不同的实验目的，48小时后即可进行靶基因表达的检测等实验。应用：观察目的基因及...
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2013-11
感受态专题：电转化流程
一、电转化感受态细胞的制备1.用枪头挑取单克隆菌落，投入盛有10mlLB液体培养基的50ml离心管中。（同时做培养基和枪头的空白对照）2.37℃，220rpm，培养14-16个小时。3.第二天，以1：...