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重组细胞因子溶解小帖士

更新时间：2013-04-15 浏览次数：1808

1．离心（Centrifuge）：高速离心 （10, 000 rpm） 20-30 秒，或低速离心 （2, 000 rpm） 5 分钟。

2．溶解（Reconstitution）：用去离子水或其它缓冲液（根据说明书要求进行选择）溶解至说明书要求的浓度 （一般为 0.1-1.0 mg/ml）。溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子*溶解后使用。溶剂的选择：
1）要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出；
2） 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。

3．分装和贮存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液，稀释可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周，如需长期保存，在稀释液中加入10%的FCS（小牛或胎牛血清）或0.1 %的BSA（牛血清白蛋白）或5% HAS（人血清白蛋白）来稳定蛋白，然后需分装冻存于-20℃ （注意：不可冻存于-50℃以下）。分装时每管中工作液的体积是一次实验的用量，以实现每次实验用完一支工作液，避免反复冻融引起蛋白活性的降低。

细胞因子量极微，所以严谨的操作是必需的，任何不适当的溶解都会造成实验的失败，造成大量的浪费。请谨慎操作！

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