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专题：转染（transfection）--转染试剂的选择

更新时间：2013-07-08 浏览次数：1988

下面我们为大家提供一些常用脂质体试剂的适用细胞系信息以及转染FAQs：
 
1.  promega公司
 
Promega转染试剂产品适合于人HeLa，Hep G2，293，K562，Jurkat；猴COS-7，CV-1；小鼠NIH3T3；仓鼠BHK，CHO；大鼠PC12；昆虫S19等等细胞系的RNAi转染。详情请参阅http：//www.promega.com.cn/files/cpxl/zhuanran/zhuanran.htm
 
2.  Invitrogen公司
 
根据经验，我公司推荐您使用Invitrogen公司生产的lipofetamine2000试剂盒。适合于Hela，BHK，HEK，COS-7，PC12，NIH3T3等各种常用细胞系的RNAi转染。详情请参阅http：//invitrogen.com/content.cfm?pageid=4547%20
 
3.  转染FAQs：
 
针对同种阳离子脂质体的疑难解答
 
Q1：转染效率低
 
A1：
（1）没有使用优化的阳离子脂质体试剂。解决建议：选择针对您的细胞类型转染效率可能zui高的阳离子脂质体试剂。参见附录A或（www.invitrogen.com）上“Transfection Collection”中的参考文献列表。
（2）没有使用优化条件。解决建议：优化阳离子脂质体试剂和DNA的量。参见第7章优化步骤。参见（www.invitrogen.com在Tech-online分子生物学部分）上的细胞特异性的转染步骤。
（3）DNA-阳离子脂质体试剂复合物在存在血清条件下形成。解决建议：在复合体形成时不要使用血清。OPTI-MEM I培养基和DMEM是用于复合体形成的较好的培养基。如果使用含有血清的培养基进行转染，保证在无血清条件形成复合物。注意：不要将OPTI-MEM I培养基用于LIPOFECTAMINE PLUS试剂或昆虫细胞。对于Sf9和Sf21细胞，Sf-900Ⅱ SFM会得到*结果。
（4）存在抑制剂。解决建议：不要在用于制备DNA-阳离子脂质体复合物的培养基中使用抗生素，EDTA，柠檬酸盐，磷酸盐，RPMI，硫酸软骨素，透明质酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。
（5）不恰当的细胞密度。解决建议：细胞密度应该在转染时融合度为70%~90%。
（6）转染DNA的启动子-增强子没有被宿主细胞识别。解决建议： 确保转染DNA的启动子-增强子同目的细胞类型兼容。
（7）阳离子脂质体试剂冻结。 解决建议：不要使用冻结的或储存温度低于4℃的阳离子脂质体试剂。
（8）转染分析的问题。解决建议： 转染分析中加入阳性对照。
（9）质粒纯化的问题。解决建议： 请核对是否使用转染级的质粒纯化试剂盒。通常转染级的质粒纯化试剂盒使用DEAE树脂而非硅树脂，并且是用重力流动（过滤）的方法而不是离心技术，因为树脂带来的污染会导致较高的内毒素。另一种方法（可用于任何级别的纯化试剂盒），是在zui后一步从树脂柱上洗脱质粒后，将溶液置于55℃的水浴上保温5分钟。zui后小心地从上至下吸取2/3的溶液（不要碰到底部）使用。这是减少树脂的交叉污染的方法。
 
 
Q2：细胞死亡率高。
 
A2：
（1）DNA量太高。 解决建议：作一个剂量-反应曲线以确定*的DNA量。在剂量-反应转染中加入阳离子脂质体试剂，因为单独DNA也会对细胞生长有一个基础的影响。参见第7章微调/优化方法。
（2）阳离子脂质体试剂量太高。解决建议： 作一个剂量-反应曲线以确定*的阳离子脂质体试剂的量。在剂量-反应转染中加入DNA，因为单独阳离子脂质体试剂也只对细胞生长有一个基础的影响。参见第7章微调/优化方法。
（3）在转染过程中使用抗菌素。 解决建议：在转染过程中不要使用氯霉素，青霉素或链霉素，因为阳离子脂质体试剂使细胞更敏感。
（4）细胞太少。 解决建议：作一个剂量-反应曲线以确定每个转染过程中*的细胞数量。根据您的应用所要求的效率调整细胞数量。
（5）在无血清条件下细胞活性降低。 解决建议：使用OPTI-MEMⅠ培养基。降低或省去在无血清培养基中清洗的次数。在转染培养基中使用5%到10%的血清。确保在不存在血清的条件下形成复合物。
（6）阳离子脂质体试剂氧化了。 解决建议：不要过分搅动或振荡阳离子脂质体试剂；这可能会形成阳离子脂质体试剂的过氧化物。
（7）对于稳定转染，筛选抗生素加入的太快。解决建议： 在加入筛选性抗生素前至少预留48小时使细胞表达抗性基因。
 
Q3：阳离子脂质体试剂-DNA复合物沉淀。注意：在显微静下可以在细胞上观察到小的颗粒状颗粒沉淀。这是正常的。此沉淀是否存在并不表明转染效率的高低。
 
A3：
（1）存在过剩的EDTA。 解决建议：使用DNA水溶液，如果是在TE中，使用浓度<0.3mM的EDTA溶液稀释DNA。
（2）DNA或阳离子脂质体试剂浓度过高。解决建议： 确保阳离子脂质体试剂和DNA的浓度不要超过复合物形成的建议量（参见表5）。
 
Q4： 转染重复性不好。
 
A4：
（1） 转染时的融合度波动。 解决建议：在不同的转染时报持所有的转染参数恒定，如融合度，传代次数和生长时相等。
（2）在培养中细胞发生变化。解决建议： 如果可能，使用来源于经选择转染效率较高亚系的细胞。如果可能，融化新鲜细胞。
 
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