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DNA实验技术：Southern 印迹实验
更新时间：2013-08-22 浏览次数：1160
Southern印迹法是将DNA段从电泳凝胶中转移至膜支持物上，使DNA段固定，因此该膜半*性地重现出凝胶电泳的带型。
实验方法
- 印迹法
- 碱性缓冲液法
- 向下毛细管转移法
- 电转印法
| 实验方法原理 | 本方案是专门为将琼脂糖凝胶印迹至不带电荷或带正电荷的尼龙膜上而设计的，稍作修改后同样可用于硝酸纤维素膜方法。 |
|---|---|
| 实验材料 | DNA |
| 试剂、试剂盒 | HCl NaCl Tris NaOH SSC 溴化乙锭 |
| 仪器、耗材 | 电泳仪 紫外透射仪 |
| 实验步骤 | 一、向上毛细管转移法的转移叠层系统：
图一、向上毛细管转移法的转移叠层系统，A表示海绵法，B表示滤纸桥法 1. 用适当的限制性内切酶消化DNA，与合适的DNA分子量标准一起进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 用溴化乙锭染色，在凝胶的侧沿放一把直尺进行照相，便于以后识别电泳带在膜上的位置。 3. 按如下方法处理凝胶，室温下轻轻摇动，要确保凝胶被*覆盖。 （1）蒸馏水：约10倍于凝胶体积的0.25 mol/l HCl，30 min。 （2）蒸馏水：约10倍体积的变性液，20 min，2次。 （3）蒸馏水：约10倍体积的中和液，20 min，2次。 4. 如图一所示安装转移叠层系统，其各层组成依次为 （1）海绵或固体支持物，置于一个盛有足以浸没海绵一半高度的20XSSC的平皿中。 （2）1张Whatman 3 MM 滤纸桥，3张Whatman 3 MM 滤纸，凝胶，包裹于凝胶边缘的塑料薄膜。 （3）1张在蒸馏水中平衡过的尼龙膜（或用蒸馏水浸湿，然后在20XSSC中平衡10 min 的硝酸纤维素膜），5张 Whatman滤纸及一叠4 cm 纸巾塔。 （4）每加一层均将其用20XSSC浸湿，并用一根10 ml 玻璃吸管在其表面小心地滚动以除去所有气泡。 5. 将一块玻璃平板放于叠层上面，其上加一重0.2~0.4 kg 的重物以使各层固定，放置。 6. 取出杂交膜，用铅笔在膜上标记样品孔的位置，井切去一角以标示方向。 7. 用2×SSC漂洗杂交膜，然后将其放在一张Whatman 3 MM 滤纸上，使其*干燥。 8. 将尼龙膜置于可透过紫外线的塑料夹层中，带有DNA的一面朝下，置于紫外透射仪（波长254 nm）上进行照射。 |
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