重组DNA技术是现代分子生物技术发展中zui重要的成就之一。即是基因工程（Gene Engineering）的核心技术。

重组DNA技术（Recombinant DNA Technique）是人类根据需要选择目的基因（DNA段）在体外与基因运载体重组，转移至另一细胞或生物体内，以达到改良和创造新的物种和治疗人类疾病的目的。

这一技术的发展和应用，关键在于限制酶的发现和应用。

一、限制酶

限制性内切核酸酶（restrictive endonucleases），又称限制酶。是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶（“分子手术刀”）。

发现于原核生物体内，现已分离出100多种，几乎所有的原核生物都含有这种酶。是重组DNA技术和基因诊断中重要的一类工具酶。

1、限制酶的命名

根据其来源命名。如：

EcoRI来源于大肠杆菌E.coli的RY13菌株,I指在该菌株中分离的*个限制酶。

2、限制酶识别序列和切割形成

每种限制酶能识别和切割的通常4～8个核苷酸序列，称为限制性位点或切点。

部分常用限制酶及切点

互补末端连接

产生相同序列的突出末端的不同片段 可有三种方式：

1）用同一种限制酶切割；

2）用识别相同靶序列的不同限制酶切割；

3）用识别不同靶序列但可产生一致的粘性末端的限制酶切割。

3、特点：

根据上述限制酶的特点，在基因工程和基因诊断中的重要用途：

1） 不论DNA的来源如何，同一种限制酶切割后产生的粘性末端容易重新连接。因此可将不同种属的DNA重组。如人和质粒DNA等。

2） 用于人类基因组的DNA分析，具特定的酶切位点。

3） Gene突变改变酶切位点的消失或新产生将改变酶切片段长度。应用于限制性片段多态性分析。

二、基因运载体及其选择

载体（Vector）:将外源目的DNA导入受体细胞，并能自我复制和增殖的工具。

载体具以下特征：

1）分子量小，便于携带较大的DNA段，能进入宿主细胞并在其中增殖；

2）有多种限制酶切点，每种限制酶只有单一切点；

3）被切割后的载体，插入外源DNA后，不影响其复制能力，并有可选择的标记基因（如，抗药基因）。

常用的载体有：质粒，λ噬菌体，粘粒，BAC，YAC，PI等。