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蛋白质技术专题：蛋白质的电转实验
更新时间：2013-12-23 浏览次数：1297
很多膜可作为蛋白质电转移的固相支持物，如重氮化纤维素膜（DPT，DBM）、DEAE-纤维素膜、尼龙膜等，但用的zui多的还是硝酸纤维素膜（NC膜），该膜与蛋白质以非共价的疏水作用形式结合，结合能力约为80 μg/cm2。
实验方法
- 基本方案
| 实验材料 | 蛋白质 |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | 转移缓冲液 甲醇 电极缓冲液 |
| 仪器、耗材 | 电转移槽 电泳仪 |
| 实验步骤 | 1. 剪6块3 MM 滤纸和一块NC膜。 2. 将剪好的3 MM 滤纸和NC膜在转移缓冲液中浸泡3-5分钟。 3. 按下列过程安装转移装置，将塑料支架平放在含转移缓冲液的托盘中，在塑料支架上放一块海绵。 4. 将3块3MM滤纸对齐放在海绵上，然后依次将NC膜、凝胶、及另3块虑纸和海绵放上。 5. 用塑料支架夹紧上述各层，放入电转移槽内，NC膜一侧向正极，凝胶一面向负极。 6. 接通电源电压120 mA，转移6小时以上或夜。 7. 转移结束后，取出塑料支架，依次取掉各层，用铅笔在膜的上沿作好标记，切下其中一个孔所对应膜的一半，用氨基黑或考马士亮兰染色，检查转移效果。 8. 将其余的NC膜放在一张干净的3 MM 滤纸上，室温干燥30~60分钟（可不做）。 |
| 注意事项 | 1. 虑纸及膜的大小不应大于待转移胶的大小，否则在转移过程中会发生短路，影响转移效果。 2. 操作中应戴手套，切不可用手直接触摸，因手上的汗和分泌物将直接影响到蛋白从胶向膜的转移。 3. 放置NC膜和滤纸时，每层之间不应有气泡，否则将影响转移效果。 4. 待转移蛋白分子量决定转移时间，分子量大，转移时间长，反之则小。 5. 干燥虽然可使蛋白质更牢固地结合到膜上，但也可能加剧蛋白 |
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