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蛋白质技术专题：核蛋白的免疫荧光定位实验
更新时间：2013-12-23 浏览次数：1989
免疫荧光技术又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展zui早的一种免疫荧光技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。
实验方法
- 免疫荧光定位法
| 实验方法原理 | 免疫荧光细胞化学技术是采用荧光素标记的已知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的靶抗原（或抗体），形成的抗原抗体复合物带有荧光素，在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照射，荧光素发出明亮的荧光，这样就可以分辨出抗原（或抗体）的所在位置及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含量，以达到对抗原物质定位、定性和定量测定的目的。 |
|---|---|
| 实验材料 | 核蛋白 |
| 试剂、试剂盒 | 甲醇 PB 一抗 二抗 |
| 仪器、耗材 | 显微镜 玻片 盖玻片 滴管 |
| 实验步骤 | 1. 在22×22 mm 的1.5号盖玻片上培养细胞。理想条件下细胞应长到50%~70%汇合。 2. 在-20℃用100%甲醇固定细胞3分钟。 3. 用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。 4. 在湿盒里以适当浓度的一抗室温温育1小时。 5. 用PBS + 1% NGS洗三次，每次10分钟。 6. 在湿盒里与稀释为4 ug/ml 的荧光标记二抗室温温育1小时。 7. 用PBS洗四次，每次10分钟。 8. 用封片剂将盖玻片封在载波片上，用干净的指甲油将盖玻片封边，防止盖玻片滑动。 |
| 注意事项 | 1. 要在盖玻片一边角落做记号，以知道细胞在盖玻片的那一面。 2. 一抗的浓度需要经过实验摸索确定。 3. 第四步中如果用22×22 mm 盖玻片，则在盖玻片上加30 ul 稀释的抗体，并且将盖玻片倒置在玻璃载玻片上，然后将载玻片放到湿盒里，在室温温育 |
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