HL-60细胞

小牛血清 RPMI1640培养液 台盼兰 琼脂 二甲基亚砜

超净工作台 二氧化碳培养箱 显微镜 培养瓶 吸管 酒精灯 血细胞计数板 多孔培养板

1.  收集对数生长期的HL-60细胞，先按实验十三测定细胞活力，然后调整细胞浓度，制成300~1 000活细胞/ml 的细胞悬液。

2.  取二个培养瓶每个瓶中加9 ml 调整好浓度的细胞悬液，然后各加入1 ml 3%琼脂（已融化，在65℃水浴中放置），迅速加入，混匀。

3.  用微量加样器吸140 μl 二甲基亚砜（MDSO），加到一个瓶中，充分混匀，为实验组，另一瓶不加DMSO，为空白对照组。

4.  取一个16 mm 多孔培养板，每孔加1 ml（35 mm 培养皿需加2 ml）细胞琼脂悬液，勿有气泡，将实验组和对照组分两组加好，盖上盖并作好标记。

5.  在室温放置20分钟使细胞琼脂悬液凝固。

6.  然后移培养板或平皿于CO₂培养箱中37℃进行培养。

7.  培养7~10天，肉眼观察并计数细胞集落。

8.  结果：以肉眼可见的细胞团（含500个以上细胞）作为计数集落的标准。对照组HL-60细胞在含0.3%的软琼脂培养基中生长良好，每个孔中可见有多个集落形成，而实验组HL-60细胞因经二甲基亚砜诱导分化，细胞在软琼脂中的集落形成明显减少。

9.  集落的计数和计算：

（1）集落数=n孔中细胞集落数总和/n孔

（2）集落形成率=集落数/接种培养细胞总数×100%