瘤组织

Hanks液

平皿 培养瓶 恒温箱

一、将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分。

二、在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎组织，切成1-2 mm³ 小块。

三、接种于培养瓶（或皿）中，37℃、5%CO₂ 或加盖并塞在普通恒温箱中培养。

一、对肿瘤细胞系或细胞株的评价
 

已建成的各种肿瘤细胞系或细胞株，无疑都是可用的实验对象。近年我国已建成的肿瘤细胞系已非常多，并获得越来越广泛的应用。但根据研究者的经验，在使用这些细胞系时，应持特别审慎态度，主要是应考虑到这些细胞在长期传代中有否发生遗传性改变的可能。*，长期传代细胞系染色体核型常是不稳定的。另外也可能发生如基因突变、基因易位或缺失等变化。其结果可能导致细胞产生生物学性状上的变动。
 

以近年建成的各种肿瘤细胞系为例，都已传代少则几十，多则百代以上后，才确认建成了细胞系。这种情况下很难保证细胞从初代到建成时的性状仍是一致的。已如前述，癌细胞在培养中并非能很顺利地传下去，凡已长期传代的细胞系，都已获得不死性。当前尚未*确证所有癌细胞都具有不死性；因此尚难肯定在长期培养中的癌细胞的生物学性状与体内时仍*相同（包括不死性）。据上述对用癌细胞系所获实验结果应尽量做分析性的结论，避免做概括性的与体内等同的结论，外推与体内等同更是不妥的。广泛来说，应用各种较长时间培养细胞做实验时，都应如此。

二、提高肿瘤细胞培养存活率和生长率措施
 

根据人们的经验，肿瘤细胞在体外不易培养，建立能传代的肿瘤细胞系更为困难。当肿瘤组织或细胞初代接种培养后，常出现以下几种情况：
 

1.  *无细胞游出或移动；
 

2.  有细胞移动和游出，但无细胞增殖，细胞长时间处于停滞状态以致难以传代；
 

3.  有细胞增殖，传若干代后停止生长或衰退死亡；
 

4.  传数代后细胞增殖缓慢，经过一段停滞期后，才又呈旺盛生长状态，形成稳定生长的肿瘤传代细胞系。
 

以上现象说明肿瘤细胞对体外生存条件有较高的要求，并需经过对新环境的适应才能生长，因此欲获得好的培养效果，不能局限于一般培养法，必须采用一些特殊的措施。
 

1.  适宜底物
 

把经过纯化的细胞接种在不同的底物上，如鼠尾胶原底层、饲细胞层等。
 

2.  生长因子
 

应用促细胞生长因子，向培养液中增加一种或几种促细胞生长因子。根据细胞种类不同选用不同的促生长物，常用有胰岛素、、雌激素以及其它生长因子。
 

为提高肿瘤细胞对体外培养环境的适应力和增加有活力癌细胞（干细胞）的数量，可采用动物体转嫁接种成瘤后，再从动物体内取出进行培养，能提高体外培养的成功率。受体动物以裸鼠。
 

3、动物体媒介培养方法
 

（1）瘤块接种：取新鲜瘤组织，用 Hanks液洗净血污，切成 1～3毫米小块，用穿刺针头吸一小瘤块，用酒精棉球擦拭动物腹部后，直接刺入皮下，注入瘤块。
 

（2）饲养观察，待肿瘤生长达较大体积后，剥取出瘤组织。
 

（3）进行体外培养。
 

（4）为防止失败，仍取部分瘤组织继续在裸鼠体内传代。通过裸鼠媒介接种，有活力的肿瘤细胞数量增多，细胞培养易于成功。