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细胞技术专题：人脐动脉平滑肌细胞培养实验
更新时间：2014-02-25 浏览次数：906
标签： 脐动脉 平滑肌 细胞培养
人脐动脉平滑肌细胞培养可以：（1）获得人脐动脉平滑肌细胞；（2）作为重大动脉疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）对血管疾病的药理学和治疗继续提供信息。
实验方法
- 消化法
- 贴块法
| 实验方法原理 | 运用消化法进行人脐动脉血管平滑肌细胞的培养，并用倒置显微镜进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。 |
|---|---|
| 实验材料 | 脐带 |
| 试剂、试剂盒 | 胶原酶消化液 胰蛋白酶 胶原酶 弹性蛋白酶 DMEM |
| 仪器、耗材 | 眼科剪 滴管 离心机 培养皿 CO2培养箱 |
| 实验步骤 | 一、实验步骤
2. 用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks’液反复清洗8~10 次。
3. 加入 10 倍体积无菌胶原酶消化液(1 mg/mL)，室温消化30 min，1000 rpm离心 5 min，弃上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次离心5 min，弃上清。
4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次离心5 min，弃上清。
5. 加胶原酶(1 mg/mL)弹性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再离心5 min，弃消化液。
6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次离心 5 min，细胞加含 10% FBS的DMEM培养基重悬，转入培养皿 37℃、5% CO2培养箱中培养即可。 |
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