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脐带血干细胞的准备

更新时间:2015-01-06 浏览次数:1247

脐带血干细胞的准备

试剂和材料:
1.运输培养基:Eagle基础培养基(EBM),添加300U/ml青霉素和300μg/ml链霉素,150μg/ml庆大霉素和1μg/ml两性霉素B;
2.夹子;
3.剪刀;
4.抗凝剂:CPDA-1:122mmol/L(26g/L)枸橼酸钠,0.142mol/L(25.5g/L)葡萄糖,15.6 mmol/L(3.0g/L)枸橼酸和18.3 mmol/L(2.2g/L)磷酸二氢钠;
5.etadine﹡或70%乙醇;
6.18号注射器针头;
7.脐带收集袋,175ml,含24.5ml CPDA-1;
8.50ml注射器,含200I.U.肝素

实验方法:
1.出生后,用两个夹子在近新生儿的末端和近胎盘的末端夹住脐带以封闭脐带;
2.剪下两个夹子间的脐带,一端在接近新生儿处,另一端剪去胎盘;
3.剪下脐带后放入运输培养基中送去实验室,整个处理过程在6-12h内;
4.用Betadine或70%酒精的棉花擦拭针头插入位点,位点在脐带近胎儿末端;
5.为了收集到zui大量的脐血,脐带的处理动作要尽可能小;
6.接着用收集袋或50ml注射器的针头插入步骤2中处理好的脐静脉插入位点;
7.将收集袋保持在低于插入位点的水平,以利于脐血在重力作用下流入容器中,或者用50ml注射器缓慢地将脐血从脐静脉内抽出。尽可能多地收集脐血,一般能收集到60-150ml;
8.如果出现静脉滑脱,可沿脐带稍上处用Betadine或70%酒精消毒后重新插入针头;
9.血流停止后,打开针头安全帽,将它推入锁定位置。注意:脐血应该保存于室温,不要冷藏;
10.如果使用袋装,用附带的卡环夹住管子,尽可能接近血袋处打两个安全结以防止泄露,然后剪去针头,将针头放入尖头容器中丢弃;
11.轻轻转动血袋或注射器几次,使脐血与抗凝剂充分混合;

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