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【感受态细胞的制备】 电击和热击感受态细胞的制备
更新时间：2013-05-15 浏览次数：1949
实验试剂
LB培养基，KB培养基，10%甘油，液氮，0.1M CaC12 溶液
实验设备
超净工作台，摇床，离心机，250mL离心瓶，0. 5mL的离心管
实验材料
实验步骤
2） 接种单克隆于5-10mL液体培养基，37℃ （大肠杆菌）或者28℃ （农杆菌和假单胞杆菌）培养过夜。
3） 按照1:100-1:500转接到500-1000mL液体培养基，37℃ 培养3-4小时（大肠杆菌）或28℃ 培养8-10小时（农杆菌和假单胞杆菌转化）至细菌达到对数生长期。
4） 将菌液装入250mL离心瓶中，冰上放置30分钟后，4℃ 离心15分钟。
5） 弃上清，加入200mL 10%甘油，于冰上缓慢将菌摇散，4℃ 离心15分钟。
6） 重复前一步骤2-3次，zui后弃上清，加入少量10%甘油重悬细菌。
7） 分装于0. 5mL的离心管中，每管40ul，液氮速冻，-80℃ 存放。
1） 挑取E.coli BL21单克隆接种到5mL LB培养液中，37℃ 振荡培养过夜。
2） 按照1:100-1:500转接到500-1000mL液体培养基，37℃ 培养3-4小时至细菌达到对数生长期。
3） 将菌液装入250mL离心瓶中，冰上放置30分钟后，4℃ 离心15分钟。
4） 弃上清，加20mL预冷的0.1M CaC12 溶液轻轻悬浮菌体，冰上放置15-30分钟后于4℃ 离心5分钟。
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