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DNA实验技术：脉冲场凝胶电泳实验
更新时间：2013-08-22 浏览次数：1783
脉冲场凝胶电泳是在两个不同方向的电场周期性交替进行的，可分离长至5Mb的DNA分子，其工作原理是DNA分子在交替变换方向的电场中作出反应所需的时间取决于它的大小。较小的分子重新定向较快，因而在凝胶中移动也较快，于是不同大小的分子被成功分离。
实验方法
- 倒转电场
| 实验材料 | DNA |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | GTBE TBE 琼脂糖 |
| 仪器、耗材 | 电泳仪 |
| 实验步骤 | 1. 制备用于水平电泳的1%琼脂糖凝胶，放入电泳装置，其上覆盖以2~3 mm 的GTBE或TBE缓冲液。 2. 加入液体样品。装好蠕动泵用于电泳缓冲液循环。 3. 对于微型凝胶调整循环速度至5~10ml/min 对于大型凝胶则用20~50 ml/min。 4. 将管端与凝胶槽中的再循环口相连，或直接放入缓冲液槽。 5. 将可编程的转换装置与恒压直流电源相连，然后将凝胶装置与转换装置相连（见下表），开始电泳直到溴酚蓝迁移1 cm，开启转换装置及蠕动泵。 6. 与标准的琼脂糖凝胶一样进行溴化乙锭染色及照相。经酸处理使DNA脱嘌呤后，凝胶可进行Southern杂交。  （1）这些公式假定使用0.5×TBE缓冲液；对于GTBE和TAE缓冲液，分离的片段将稍大，并且电泳速度分别要快约20%和30%。 （2）变量：T，温度（℃）；V，电场通度（V/cm）；A，琼脂糖百分浓度（对于脉冲场级琼脂糖乘以0.8）；脉冲时间（对于倒转电场凝胶指反向时间，单位s）；R，正向与反向电泳时问比率；θ，改向角度。 （3）倒转电场凝胶不能分离此范围以外的长度，变角度凝胶可以分离此范围以外的片段，且效果不是很好。 |
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