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DNA实验技术:琼脂糖核酸电泳

时间:2013-08-22 浏览次数:1385

1. 用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架好梳子;

2. 根据欲分离 DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶:准确称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入电泳缓冲液(一般20~30 ml) ;

3. 放入到微波炉内加热熔化。冷却片刻,加入一滴荧光染料,轻轻旋转以充分 混匀凝胶溶液,倒入电泳槽中,待其凝固;

4. 室温下 30~ 45 分钟后凝胶完全凝结, 小心拔出梳子, 将凝胶安放在电泳内槽;

5. 向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面 1mm 为宜,如样品孔内有气 泡,应设法除去;

6. 在 DNA 样品中加入 10×体积的载样缓冲液(loading buffer) ,混匀后,用枪 将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内;

7. 接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA 样品由负极往正极泳动 ( 靠近加样孔的一端为负) 。一般 60~100V 电压,电泳 20~40min 即可;

8. 根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳;

9. 电泳完毕,关上电源,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子 量标准 Marker 比较被扩增产物的大小。

琼脂糖凝胶浓度与线形 DNA的*分辨范围

琼脂糖凝胶浓度 线形 DNA的*分辨范围(bp)
0.5% 1,000~30,000
0.7% 800~12,000
1.0% 500~10,000
1.2% 400~7,000
1.5% 200~3,000
 2.0%  50~2,000

编辑: hollyemp
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