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【琼脂糖凝胶电泳】 真假GelRed对比试验

时间:2013-09-04 浏览次数:2178

目前市场上几种代表性的核酸染料:
 
GelRed是一款集高灵敏度、低毒性和光稳定性于一体的核酸凝胶染料。由于染料分子不能透过人体细胞膜,保证了实验环境的安全与洁净。该产品已通过美国环保局安全认定,废弃物可直接倒入下水道,不会造成任何环境污染。
 
EB (溴化乙啶)是早期分子实验中常用的小分子核酸凝胶染色剂,但染色效果并不灵敏,背景荧光信号太强,分辨率不高。zui重要的EB是一种高诱变性致癌的化学物质。
 
SYBR Green I和 SYBR Gold 也被厂家宣传为灵敏的凝胶染色试剂。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微碱性电泳缓冲溶液或预制凝胶中会快速降解,稳定性差导致染色效果极不可靠。 SYBR safe 虽然被认为安全,但它的染色灵敏度远远达不到标准。
 
Goldview从对比试验结果来看,该产品就是AO(丫啶橙,一种致癌产品,且荧光亮度不佳)。请看Goldview 与 AO 对比试验结果。

下面看一下实验结果:
 
结果一:
 
图一结果显示:采用同样的样品及电泳条件(点泳池中跑4块25 ml的凝胶):
 
美国原装GelRed实验效果,原装GelRed染色背景低,染料灵敏度高,分辨率强。
 
而某假货GelRed和EB背景亮度相当。另外在使用过程中:发现biotium的GelRed染料呈鲜艳的紫红色,加入后极易扩散,不会挂在烧瓶壁上,而假货生物的染料呈暗淡的红色偏褐,加入时不易扩散,需摇晃才能扩散,且扩散后颜色偏土黄。
 
就实验特征而言,假货经销商的gelred和EB的添加效果非常相似,怀疑其中有添加EB或goldview。
 
图1 原装GelRed、假货GelRed、DuRed及EB四种核酸凝胶染料的效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒(浓度100 ng/ul,上样量均为3 ul);marker采用天根生化的DNAmarker 3;染料使用量均为1 ul染料加入25 ml琼脂糖凝胶中;条件 1%浓度的琼脂糖凝胶,电压150V;400A 时间为20 min。EB采用泡染法染色8 min。
 
结果二:
 
图二就推荐浓度问题做了对比试验,结果表示:按照推荐浓度(1:10000,如2.5 ul加入到25 ml胶中),GelRed染料由于染料分子偏大,会对marker的大片段迁移有一定影响,偶尔会造成拖带,微笑条带等情况。但是小片段分离效果较好;
 
另外某假货经销商的假货GelRed小条带几乎弥散,消失不见了。
 
图2 原装GelRed与假货GelRed染料按照推荐浓度跑胶效果对比图。所使用的样品均采用小片段质粒(浓度100 ng/ul,上样量均为3 ul);marker采用天根生化的DNAmarker 3;染料使用量均为2.5 ul染料加入25 ml琼脂糖凝胶中;条件 1%浓度的琼脂糖凝胶,电压150V;400A 时间为20 min。
 
综合以上结果,可以看出:
 
1.  假货GelRed背景很亮与EB相似,使用颜色又有点偏向GoldView红褐色;怀疑假货中掺入的是致癌诱变染料EB与GoldView的混合物;而且小片段容易弥散,消失。
 
2.  原装GelRed的*使用浓度为 2 ul加入到50 ml胶,1ul加入25 ml胶中(图一)。说明书中推荐浓度使用染料时,偶尔会影响大片段DNA的迁移。
 
建议广大用户从厂商购买安全的原装产品,避免上当受骗。
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