实验步骤

1. LB 培养基

加水至 1000 mL（pH 7.2，固体培养基加 1.8% 琼脂粉）。

2. LB 抗性筛选培养基

待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右，加入抗生素储存液至终浓度 50 μg/mL，即每毫升培养基加抗生素储存液 1 μL，摇匀后，倒平板。

液体 LB 抗性筛选培养基，在*冷却后加入抗生素，加入的量与固体培养基相同。

3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培养基

在含 100 μg/mL Amp 的 LB 琼脂平板上加入 40 μL X-gal 贮存液和 40 μL IPTG 溶液，用无菌玻璃涂布器把溶液均匀涂布于整个平板表面，超净工作台上吹干后备用。

4. SOC 液体培养基

加入 950 mL 水，*溶解后加入 250 mmol/L 的 KCl 溶液 10 mL，用NaOH 溶液（5 mmol/L）调节 pH 值至 7.0，双蒸水定容至 1000 mL 后高压灭菌。灭菌后降温至 60℃以下，加入 7.2 mL 50% 葡萄糖溶液。使用前加入5 mL 经灭菌的 2 mol/L 的 MgCl₂ 溶液。