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LB培养基的配制

时间:2015-05-15 浏览次数:2753

实验步骤


1. LB 培养基

Tryptone

10 g

Yeast Extract

5 g

NaCl

10 g

加水至 1000 mL(pH 7.2,固体培养基加 1.8% 琼脂粉)。

2. LB 抗性筛选培养基

待灭菌后的 LB 固体培养基温度降至 50℃左右,加入抗生素储存液至终浓度 50 μg/mL,即每毫升培养基加抗生素储存液 1 μL,摇匀后,倒平板。

液体 LB 抗性筛选培养基,在完全冷却后加入抗生素,加入的量与固体培养基相同。

3. LB/Amp/IPTG/X-gal 培养基

在含 100 μg/mL Amp 的 LB 琼脂平板上加入 40 μL X-gal 贮存液和 40 μL IPTG 溶液,用无菌玻璃涂布器把溶液均匀涂布于整个平板表面,超净工作台上吹干后备用。

4. SOC 液体培养基

Tryptone

20 g

Yeast Extract

5 g

NaCl

0.5 g

加入 950 mL 水,完全溶解后加入 250 mmol/L 的 KCl 溶液 10 mL,用NaOH 溶液(5 mmol/L)调节 pH 值至 7.0,双蒸水定容至 1000 mL 后高压灭菌。灭菌后降温至 60℃以下,加入 7.2 mL 50% 葡萄糖溶液。使用前加入5 mL 经灭菌的 2 mol/L 的 MgCl溶液。

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