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DNA实验技术:染色体GTG标本制备

时间:2013-08-06 浏览次数:1290

一、原理

非显带染色体除可根据形态分辨部分染色体,其他多数染色体难以确认,而显带技术则可使染色体纵向长度上出现不同带纹,以辨认全部染色体。GTG即G带,Trypsin(胰酶),Giemsa的简写。Giemsa染料是噻嗪——曙红染料,染色体的着色有赖于在原位形成噻嗪--曙红(2∶1)的沉淀物。着色首先取决于二个噻嗪分子同DNA结合,在此基础上再结合一个曙红分子,其次取决于一个疏水环境,以利于染料沉淀而着色。通过胰酶的显带预处理可除去阴性G带区的疏水蛋白,或使它们的结构变成更疏水状态。由此可知,在G显带中抽取的蛋白往往是疏水的,且主要来自阴性G带区。

二、用品和试剂

0.25%胰酶(0.85%NaCl配制,pH为7.2-7.4),余同实验一。

三、操作步骤

1. 标本老化:

按常规制备人外周血淋巴细胞染色体标本(未染色)气干后,经78℃烘箱2-3小时。 取出置37℃恒温箱3天后预处理。

2. 胰酶预处理:

将染色体标本浸入胰酶溶液(已置4℃冰箱稳1小时以上)中40-50秒,取出立即水洗去多余胰酶。

3. Giemsa染色:

1∶10 Giemsa染色液染色5-10分钟,洗去多余染料,气干。

4. 镜检:油镜下可见分散良好的染色体纵轴上呈现深浅不同带纹,即为可读标本。

四、注意事项

1. 常规制备的染色体标本,要有较多分裂相,分散良好,染色体长度适中。

2. GTG带的关键在于胰酶处理的时间。若染色体仍着色较深,带纹不明,则预处理时间不足,应延长预处理时间;若染色体变粗并显出毛糙边缘,甚至呈糊状,则为预处理过度,应适当缩短处理时间。

3. Giemsa染色时间要适中,时间短,着色不够,深浅带反差小;时间过长,着色深,亦影响带纹反差,不易识别。

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